上期文章我們結(jié)合當(dāng)前干細(xì)胞市場巨大的發(fā)展前景和多項(xiàng)行業(yè)扶持政策以及當(dāng)前干細(xì)胞藥物申報(bào)現(xiàn)狀，闡述了友康GMP級間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的開發(fā)思路。其化學(xué)成分完全限定、無需更換培養(yǎng)基即可傳至P20并保持細(xì)胞干性的高性能、兼顧細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)與培養(yǎng)性能的平衡這三個(gè)特點(diǎn)。助力用戶從源頭大幅度降低適應(yīng)癥開發(fā)與質(zhì)量控制方面的工作量，對于客戶申報(bào)藥物和創(chuàng)新研究方面有重要的作用。

國際細(xì)胞學(xué)會(huì)曾定義間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)至少滿足三大基本要求：1、貼壁生長；2、表面標(biāo)志物CD105、CD73、CD90≥95%，表面標(biāo)志物CD45、CD34、CD14 或 CD11b、CD79α或 CD19、HLA-DR≤2%；3、能進(jìn)行成骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞的三系分化。本期我們將從這三個(gè)方面用基礎(chǔ)數(shù)據(jù)來論證這款培養(yǎng)基培養(yǎng)出的間充質(zhì)干細(xì)胞的基本干性。

一、貼壁生長

貼壁生長是檢驗(yàn)間充質(zhì)干細(xì)胞是否合格的重要特征，其貼壁形態(tài)呈短梭形，分裂方式以規(guī)則的紋理狀生長。其中血清或血清替代物體系的MSC形態(tài)較為狹長，粒徑相對較大。無血清及成分明確級別的培養(yǎng)基由于其對MSC生長有利的組分更加清晰，因此細(xì)胞形態(tài)學(xué)上更加立體飽滿，粒徑較小，相對而言每一代次的擴(kuò)增倍數(shù)就更高，傳代成本更低。

此外，成分明確的干細(xì)胞培養(yǎng)基有一大問題是貼壁能力的下降。貼壁組分的添加量與維持干細(xì)胞傳代性能方面息息相關(guān)，因此市面上不少無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞貼壁能力不能與血清體系相比，比較依賴TC處理較好的培養(yǎng)瓶，細(xì)胞工廠及更大規(guī)模的培養(yǎng)體系更不理想，細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)大量因貼壁能力缺失導(dǎo)致的空洞或分裂方向錯(cuò)亂。

友康GMP級間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基徹底解決以上問題，在保障細(xì)胞分裂能力的同時(shí)改善其貼壁能力，細(xì)胞形態(tài)無論在早期還是高代次均呈現(xiàn)顆粒分明的短梭形，在P10以上代次僅有擴(kuò)增倍數(shù)的下降，但基本沒有呈片狀老化的細(xì)胞，同時(shí)能夠適應(yīng)大部分的大規(guī)模培養(yǎng)體系。

P1代次

P13代次

復(fù)蘇培養(yǎng)的P10代次

細(xì)胞工廠培養(yǎng)

二、表面標(biāo)志物

CD105是細(xì)胞表面I型膜糖蛋白，在細(xì)胞遷移方面發(fā)揮重要作用。CD90廣泛表達(dá)于各類干細(xì)胞的表面，涉及細(xì)胞間的粘附、遷移，若細(xì)胞貼壁能力缺失或產(chǎn)生接觸抑制，CD90會(huì)有明顯下降。

幾種陰性標(biāo)志物主要為血液類細(xì)胞的標(biāo)志物，MSC不應(yīng)有所表達(dá)。因此，對于高代次的MSC，CD105和CD90若正常表達(dá)，一般所有的指標(biāo)都沒有異常。GMP級間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基能夠穩(wěn)定維持高代次陽性標(biāo)志物在98%以上。

P11表面標(biāo)志物鑒定

三、貼壁生長

能夠進(jìn)行三系分化誘導(dǎo)是MSC的基本能力，理論上不應(yīng)隨著細(xì)胞傳代而下降。曾有數(shù)據(jù)反饋MSC在連續(xù)傳代的過程中會(huì)逐漸分化為成纖維樣細(xì)胞，導(dǎo)致其三系分化能力下降。而成分限定級別的培養(yǎng)基能有效避免這一問題，在高代次下維持其三系分化能力穩(wěn)定。

成脂                                                  成骨                                                      成軟骨

本期我們聊了友康GMP級間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基所培養(yǎng)出的MSC的基本特性，貼壁能力的加強(qiáng)、表面標(biāo)志物及三系分化的穩(wěn)定顯示出這款產(chǎn)品在MSC基本質(zhì)量中的穩(wěn)定性。下一期我們將用數(shù)期實(shí)驗(yàn)論證MSC檢測學(xué)方面的優(yōu)勢，一點(diǎn)點(diǎn)揭開友康“GMP級間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基”的神秘面紗！