NK細(xì)胞培養(yǎng)的高效方法

目前的NK細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)主要有兩種，一種是以腫瘤細(xì)胞為培養(yǎng)基質(zhì)的飼養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)法；另一種是以抗體誘導(dǎo)的純因子培養(yǎng)法。前者對(duì)NK的擴(kuò)增倍數(shù)和培養(yǎng)純度效果要稍好一些，但是存在腫瘤細(xì)胞的殘留問題，有一定風(fēng)險(xiǎn)；而純因子法培養(yǎng)的NK細(xì)胞根據(jù)不同誘導(dǎo)抗體，培養(yǎng)出的NK數(shù)量和純度大不相同，即使使用同一種誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，對(duì)不同個(gè)體的PBMC誘導(dǎo)培養(yǎng)效果也參差不齊，沒有一套絕對(duì)穩(wěn)定的培養(yǎng)方案。

經(jīng)過近幾年國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，HSP70、HER2、EGFR等幾個(gè)靶向受體對(duì)NK細(xì)胞的誘導(dǎo)效率相對(duì)較高，IL2/12/15/18/21等細(xì)胞因子能大幅度增加NK細(xì)胞的數(shù)量和活性，其中IL12能提高記憶性NK細(xì)胞的形成、IL2/15/21能有效提高NK細(xì)胞的增殖數(shù)量、IL18能增強(qiáng)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性。

其中自體NK細(xì)胞體外培養(yǎng)目前相對(duì)高效的方法是，以HER2單抗為誘導(dǎo)因子，IL2/12/15/18為活化因子的培養(yǎng)體系，單次采血50ml，能有效培養(yǎng)出70-100億細(xì)胞單位的制劑，大幅提高臨床使用的頻率和劑量。具體實(shí)施方案為：1-3mg/ml曲妥珠單抗（HER2）37℃包被培養(yǎng)瓶（3-5ml/T75培養(yǎng)瓶）1-2小時(shí)，接種4千萬-6千萬PBMC（接種密度維持在150萬-300萬/ml），第一周加入含1000-2000IU/ml IL2、20-40ng/ml IL12、60-100ng/ml IL15、30-60ng/ml IL18和10-15%自體血清的免疫細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，每隔2-3天翻倍補(bǔ)加培養(yǎng)基，第7天進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)袋，轉(zhuǎn)袋后加入含1000-2000IU/ml IL2和20-50ng/ml IL21的免疫細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，每隔2天翻倍補(bǔ)加培養(yǎng)基，第10天之后每隔2天按1.5倍補(bǔ)加培養(yǎng)基，培養(yǎng)15-16天后收集細(xì)胞。