干細胞培養(yǎng)難度大,需要充足的營養(yǎng)成分對其進行支持,對于培養(yǎng)體系及試驗人員的技術(shù)的也有更高的要求。目前常用的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)方法有三種:傳統(tǒng)的飼養(yǎng)層培養(yǎng)法和無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法,以及近幾年新興的干細胞直接培養(yǎng)法。
飼養(yǎng)層培養(yǎng)方法:飼養(yǎng)層培養(yǎng)法,先對飼養(yǎng)層細胞進行培養(yǎng),再將干細胞接種到飼養(yǎng)層細胞上,最后收獲所需的干細胞,該過程需要一周或更長的培養(yǎng)時間。優(yōu)點是培養(yǎng)干細胞效果相對較好;缺點是實驗流程冗雜,使用的試劑復(fù)雜,實驗周期很長,對實驗人員的熟練度有較高要求。
五飼養(yǎng)層培養(yǎng)方法:無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法,直接培養(yǎng)干細胞,無需培養(yǎng)飼養(yǎng)層細胞。優(yōu)點是培養(yǎng)流程簡單;缺點是需自行優(yōu)化培養(yǎng)液,有時需要花大力氣去測試血清、培養(yǎng)基及添加因子的種類和比例,非常耗時耗力,且培養(yǎng)出來的干細胞穩(wěn)定性也不太容易保證。
干細胞直接培養(yǎng)方法:干細胞直接培養(yǎng)法是近幾年,隨著干細胞專用培養(yǎng)基的誕生,逐漸開始的干細胞培養(yǎng)法。干細胞直接培養(yǎng),無飼養(yǎng)層細胞參與。加入的培養(yǎng)液是已經(jīng)商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化的干細胞專用培養(yǎng)基,大多無需配制,可直接使用。優(yōu)點是培養(yǎng)液無需探索配方, 可直接使用;實驗流程簡單;缺點是由于不同廠家的干細胞專用培養(yǎng)基的配方不同,所以有相當(dāng)多的干細胞挑不到合適的完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)效果不好。很多價格昂貴,是傳統(tǒng)培養(yǎng)液(胎牛+普通培養(yǎng)基+添加細胞因子)數(shù)倍。