友康GMP級(jí)干細(xì)胞培養(yǎng)基在日本完成清關(guān)，助力客戶高效提取外泌體

干細(xì)胞外泌體作為細(xì)胞產(chǎn)物的核心生物制品，其產(chǎn)品的質(zhì)量與宿主細(xì)胞的質(zhì)量密切相關(guān)。在干細(xì)胞培養(yǎng)和純化過程中，傳統(tǒng)的干細(xì)胞培養(yǎng)基成為最大瓶頸。采用常規(guī)干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，不僅細(xì)胞易限制在2D培養(yǎng)環(huán)境中，且無法避免雜質(zhì)顆粒的干擾，效率低雜質(zhì)多，純化難度大。在外泌體的分離純化過程中，相對(duì)寬泛的尺寸范圍導(dǎo)致外泌體與其他細(xì)胞外囊泡混合，從而削弱了外泌體的靶向能力，最終會(huì)對(duì)外泌體制劑的產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生影響。

因此，要獲得臨床級(jí)別的治療性外泌體，需對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)條件進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。根據(jù)中國(guó)食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進(jìn)會(huì)發(fā)布公告定制的《人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體制備與檢驗(yàn)規(guī)范》（T/FDSA 0049—2024）規(guī)定“外泌體應(yīng)從培養(yǎng)干細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中獲得。條件培養(yǎng)基應(yīng)避免外源性外泌體的干擾，不包含相應(yīng)添加物，例如胎牛血清(FBS或FCS)、血小板裂解物、垂體提取物、膽汁鹽等其他復(fù)合產(chǎn)品。否則應(yīng)建立方法，以評(píng)估培養(yǎng)基中干擾物所產(chǎn)生的影響。”

一、低不溶性微粒含量：優(yōu)化外泌體樣本質(zhì)量

藥用外泌體制劑必須采用GMP級(jí)別的生產(chǎn)流程，在其分離與純化過程中，微粒污染是一項(xiàng)重要挑戰(zhàn)。不溶性微粒是指非故意存在于溶液中的除氣泡外的可移動(dòng)的不溶性粒子。它的存在可能會(huì)干擾外泌體的分離效果，甚至掩蓋外泌體所攜帶的功能性成分，對(duì)產(chǎn)品的穩(wěn)定性和質(zhì)量產(chǎn)生影響。

在日本藥典中，明確提出對(duì)培養(yǎng)基中不溶性顆粒物檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)要達(dá)到注射針劑的標(biāo)準(zhǔn)，即“使用光阻法進(jìn)行測(cè)定時(shí)，標(biāo)示量在100mL以上的注射劑，每毫升中含10μm以上的微粒數(shù)不超過25個(gè)，25μm以上的微粒數(shù)不超過3個(gè)；標(biāo)示量小于100mL的注射劑，10μm以上的微粒數(shù)不超過6000個(gè)，25μm以上的微粒數(shù)不超過600個(gè)?！?/strong>

為使廣大客戶用得放心，友康GMP級(jí)間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基套裝在設(shè)計(jì)之初就經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制，并委托第三方機(jī)構(gòu)嚴(yán)格依據(jù)藥典中不溶性微粒檢查法（光阻法）進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示每毫升樣品中10μm以上的微粒數(shù)為22粒，25μm以上的微粒數(shù)僅為1粒。這一數(shù)據(jù)充分證明了友康生物在保障培養(yǎng)基純凈度與安全性方面的不懈努力與顯著成效，為客戶在外泌體及干細(xì)胞相關(guān)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用提供了可靠的技術(shù)支持與保障。

二、少量重組蛋白：提高外泌體得率與純度

多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，含有胎牛血清（FBS）的培養(yǎng)基會(huì)對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的生理狀態(tài)、外泌體的產(chǎn)生或釋放產(chǎn)生影響。并且由于FBS內(nèi)含不明成分的囊泡和非囊泡顆粒污染物（如EVs、脂蛋白、蛋白復(fù)合體等），與外泌體具有相似的大小、密度或RNA成分，也會(huì)影響外泌體的體內(nèi)外功能研究。此外，從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化的角度出發(fā)，減少前端引入的雜蛋白含量，直接關(guān)聯(lián)到后續(xù)純化過程中雜蛋白去除步驟的簡(jiǎn)化。這意味著每減少一次純化步驟，就能減少浪費(fèi)，提高外泌體的得率。因此，迫切需要一款無血清、低蛋白且化學(xué)成分明確的培養(yǎng)基來滿足干細(xì)胞外泌體的上游細(xì)胞培養(yǎng)需要。

友康GMP級(jí)間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基套裝是一套適用于MSC細(xì)胞的無血清、化學(xué)成分限定培養(yǎng)基，不含任何動(dòng)物源及人源成分，細(xì)胞培養(yǎng)過程中無需添加血清或血小板裂解物，極大地減少了外源蛋白的引入，降低了下游純化系統(tǒng)的操作難點(diǎn)，提高外泌體終產(chǎn)品的得率與純度。產(chǎn)品批間差異小且所有原料均符合GMP標(biāo)準(zhǔn)，更適合臨床研究用途。

外泌體藥物從小規(guī)模研發(fā)擴(kuò)展到工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)，并進(jìn)入后續(xù)臨床試驗(yàn)的過程中，臨床級(jí)外泌體的大規(guī)模生產(chǎn)面臨重大挑戰(zhàn)。外泌體的產(chǎn)量高度依賴于其供體細(xì)胞，受限于不同細(xì)胞分泌外泌體的能力以及大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)的困難與高成本。目前，相較于2D培養(yǎng)方法，3D培養(yǎng)系統(tǒng)如中空纖維生物反應(yīng)器、攪拌懸浮式生物反應(yīng)器等解決了單層貼壁細(xì)胞表面積有限這一問題，可以短時(shí)間內(nèi)培養(yǎng)大量細(xì)胞制造外泌體。

友康GMP級(jí)間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基套裝不僅能夠改善細(xì)胞貼壁與適應(yīng)能力，并且對(duì)于培養(yǎng)基體系更換或培養(yǎng)耗材更換的適應(yīng)力極強(qiáng)。細(xì)胞形態(tài)無論在早期還是高代次均呈現(xiàn)顆粒分明的短梭形，在P10以上代次僅有擴(kuò)增倍數(shù)的下降，但基本沒有呈片狀老化的細(xì)胞，支持細(xì)胞工廠及微載體等大規(guī)模3D培養(yǎng)體系，為外泌體的大規(guī)模制備與應(yīng)用提供了有力的上游支撐。

綜上，憑借其卓越的不溶性微?？刂扑?，精簡(jiǎn)的蛋白組分以及支持高效的3D擴(kuò)大培養(yǎng)技術(shù)，友康GMP級(jí)間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基套裝能夠有效保障外泌體的得率和安全性，助力客戶收獲高質(zhì)量外泌體終產(chǎn)品。