四大經(jīng)典核酸純化方法

一、PC抽提法

PC 抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過(guò)了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會(huì)被一次去除，必須靠多次抽提，方可徹底去除。且每次抽提都會(huì)損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以徹底去除，以及基因組DNA 會(huì)斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。

PC 抽提的另外一個(gè)用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA 的特點(diǎn)，在RNA 抽提時(shí)獲得DNA 殘留極少的RNA。不過(guò)有一點(diǎn)要提醒的是，某些植物樣品，在去除某些雜質(zhì)之前，是不能使用PC 抽提的，否則核酸必定降解。PC抽提最大的優(yōu)勢(shì)是成本低廉，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較低，對(duì)于經(jīng)費(fèi)緊張的實(shí)驗(yàn)室較為實(shí)用。

二、高鹽沉淀法

高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法，同樣也是一個(gè)非常不錯(cuò)的方法。與PC 抽提方法相比，除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點(diǎn)外，該方法幾乎克服了PC 抽提的所有缺點(diǎn)。更快、更輕松的去除蛋白質(zhì)所可以用于大規(guī)模抽提，但其不足之處是純度(蛋白質(zhì)殘留) 不夠穩(wěn)定，蛋白質(zhì)的沉淀效率在4℃會(huì)更好一些。

三、離心柱法

離心柱純化法，是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其最大特點(diǎn)是受人為操作因素影響小，純度的穩(wěn)定性很高(雖然純度不一定比PC 純化方法更高)。加入的液體通過(guò)離心后會(huì)進(jìn)入另外一個(gè)離心管中，與含有核酸的柱子完全是分開(kāi)的，所以洗滌更徹底。其致命弱點(diǎn)是樣品過(guò)量，提取效率較低，且需要反復(fù)離心，操作復(fù)雜，成本也較高。

四、生物磁珠法

生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級(jí)生物磁珠表面，通過(guò)介質(zhì)對(duì)核酸的吸附，在外加磁場(chǎng)下使核酸附著于磁珠定向移動(dòng)，從而達(dá)到固液分離純化的作用。