友康生物
2023-03-21
公司熱點(diǎn)NK細(xì)胞密度低？
細(xì)胞生長緩慢？
達(dá)不到理論培養(yǎng)效果？
究竟是哪一步出了問題？
該怎么排查結(jié)果不理想的原因？
自從友康NK細(xì)胞無血清培養(yǎng)基套裝5.0上市以來，我們收到了很多用戶的正面反饋：細(xì)胞長得快、細(xì)胞形態(tài)好、培養(yǎng)出來的細(xì)胞活率高、不管什么樣的樣本都可以收獲到不錯的細(xì)胞數(shù)……然而，也出現(xiàn)了不同的聲音，一小部分客戶反映他們培養(yǎng)出的細(xì)胞不太理想，并沒有達(dá)到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)效果。
實(shí)際上，在進(jìn)行NK細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時，影響最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素非常多。為了幫助客戶解決問題，友康根據(jù)以往經(jīng)驗(yàn)，為大家整理了實(shí)驗(yàn)過程中最容易被大家忽視但卻極易影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的四個關(guān)鍵點(diǎn)，希望大家實(shí)驗(yàn)路上能夠順風(fēng)順?biāo)?/p>
一、采血環(huán)節(jié)需注意
（1）為了避免抗凝劑占比過高影響自體血漿的使用，應(yīng)使臍血中的抗凝劑占比低于30%。
如用采血袋采集血樣，建議使用100mL容量的采血袋。如果采血時用200mL采血袋，建議取出14mL 抗凝劑。
（2）因?yàn)镋DTA會影響NK細(xì)胞的激活與擴(kuò)增，采集血樣時禁止使用 EDTA 抗凝的真空采樣管，可以選用肝素鈉抗凝的真空采血管。
二、培養(yǎng)基配制與補(bǔ)液
（1）高性能版培養(yǎng)基配制
激活培養(yǎng)基：200mL基礎(chǔ)+200uL YC00C。第0天配。D0-D5使用。
擴(kuò)增培養(yǎng)基：1.8L基礎(chǔ)+1.8mL YC005。第7天配。D7開始使用。
（2）標(biāo)準(zhǔn)版培養(yǎng)基配制
培養(yǎng)基A：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+YC005，第0天配。D0及D9后使用。
培養(yǎng)基B：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+YC005+YC00C，第3天配。D3-D9使用。
（3）每次補(bǔ)液時添加的培養(yǎng)基需預(yù)溫，用多少取多少，禁止將整瓶培養(yǎng)基預(yù)溫、禁止反復(fù)預(yù)溫。
（4）培養(yǎng)基現(xiàn)配現(xiàn)用，配成完全培養(yǎng)基后4°保存。
三、培養(yǎng)基配制與補(bǔ)液
（1）使用TC處理水平較高的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)瓶，2L體系套裝建議以2個T25瓶起始培養(yǎng)。
（2）盡可能使用大體積的培養(yǎng)袋，促進(jìn)細(xì)胞間的氣體交換，防止代謝廢物過多影響細(xì)胞增殖。
如采用1L培養(yǎng)體系，推薦使用2L培養(yǎng)袋；采用2L培養(yǎng)體系，推薦每個1L體系使用1.8L培養(yǎng)袋。
（3）剛?cè)氪鼤r，一般細(xì)胞培養(yǎng)袋大而細(xì)胞液體積小，建議將培養(yǎng)袋對折使用（d7），選擇合適的底面積培養(yǎng)。
（4）接種密度
外周血的推薦接種密度為1.5-2E6cells/mL。
臍血UCBMC的推薦接種密度為2.5-3E6cells/mL。
四、避免細(xì)胞機(jī)械損傷
（1）細(xì)胞接種后，第1-3天會形成懸浮細(xì)胞小團(tuán)，第3-5天絕大部分懸浮細(xì)胞團(tuán)貼壁，不可將其晃起，第5-7天貼壁的細(xì)胞團(tuán)變大、變多，這些都是正常的細(xì)胞形態(tài)。
（2）培養(yǎng)前期一定不要吹打細(xì)胞團(tuán)（D0-D5），以減少細(xì)胞機(jī)械損傷。
注：高性能版產(chǎn)品對實(shí)驗(yàn)人員標(biāo)準(zhǔn)操作要求更為嚴(yán)格，對試劑盒穩(wěn)定性更為敏感，完全培養(yǎng)基切忌反復(fù)預(yù)溫，接種密度可大不可小。有任何實(shí)驗(yàn)操作前后的疑問都可同廠家技術(shù)人員溝通。
◆NK培養(yǎng)基產(chǎn)品選擇指南
友康NK細(xì)胞無血清培養(yǎng)基套裝5.0最主要的特點(diǎn)就是支持全樣本、全場景的培養(yǎng)，您可以根據(jù)不同的培養(yǎng)需求而選擇不同版本的產(chǎn)品，參考依據(jù)如下：
版本類型 | 標(biāo)準(zhǔn)版 | 高性能版 |
核心技術(shù)特點(diǎn) | 多通道激活技術(shù) | 增強(qiáng)型多通道激活技術(shù) |
版本參考依據(jù) | 1、培養(yǎng)前均能檢測樣本初始 NK 表型，且初始陽性率在10%以上。 2、對超高陽性率沒有強(qiáng)制需求(90%以上)。 3、可以接受有的特殊樣本培養(yǎng)陽性率達(dá)不到70%以上。 | 1、初始樣本陽性率低，或不檢測初始樣本陽性率。 2、對超高陽性率有很大需求 (90% 以上)。 3、追求超高培養(yǎng)成功率與容錯率。 |
樣本適用類型 | 新鮮外周血 | 新鮮外周血 |
新鮮臍帶血 | 新鮮臍帶血 | |
凍存的外周血 PBMC | 凍存的外周血 PBMC | |
凍存的臍帶血 UCBMC | 凍存的臍帶血 UCBMC |
此外，我們還根據(jù)不同用戶對NK細(xì)胞收獲量的要求不同，設(shè)計(jì)了不同的培養(yǎng)體系，詳情可以咨詢友康技術(shù)人員，為您提供專業(yè)指導(dǎo)。
