臍帶間充質(zhì)培養(yǎng)基提供商分享從事 UCMSC制備工作相關要求

臍帶間充質(zhì)培養(yǎng)基提供商友康生物整理對從事 UCMSC制備工作的相關要求如下:

1.從事UCMSC的技術(shù)人員必須進行體檢，消除攜帶細菌、病毒、支原體、衣原體等病原微生物和傳染病，避免操作過程中污染細胞的可能性。長期從事這項工作的技術(shù)人員應每半年進行一次體檢，傳染病患者不得參與UCMSC的制備。

2.進入細胞制備實驗室的人員必須學習和了解實驗室管理要求，遵守實驗室操作流程和規(guī)范，服從實驗室管理人員的監(jiān)督管理。

3.為避免錯誤事故，UCMSO制備過程應由三名細胞生物學專業(yè)或?qū)I(yè)培訓技術(shù)人員密切配合，在合格的細胞工程實驗室實施，其中兩名技術(shù)人員主要負責超凈工作臺上的細胞處理操作，另一名技術(shù)人員主要負責過程監(jiān)督和操作人員的技術(shù)操作行為，防止技術(shù)錯誤和樣品標簽書寫錯誤，協(xié)助離心機操作，傳遞所需物品和信息。

4.應合理控制進入實驗室的人數(shù)。進入細胞制備實驗室的操作技術(shù)人員必須注意個人衛(wèi)生，避免長發(fā)、長指甲暴露造成細胞污染，嚴格按照規(guī)定佩戴無菌隔離服和手套，嚴禁將任何與工作無關的日用品（如手機、各種珠寶等）帶入干細胞儲存，嚴禁談論與當時工作無關的話題。

5.按照人流和物流分離的原則，嚴格執(zhí)行物流通道和人員進入通道分離的管理制度。臍帶組織容器必須經(jīng)酒精徹底消毒后才能進入UCMSC制備實驗室。所有進入實驗室的物品必須在傳輸窗口包裝消毒后轉(zhuǎn)入操作室。嚴禁不合格設備和培養(yǎng)試劑進入實驗室造成污染。

6.標準化的設施和設備條件是保證UCMSC制備和質(zhì)量的基礎。建立符合GMP標準的UCMSC生產(chǎn)標準化實驗室，配備必要的細胞制備和質(zhì)量控制基礎設備。建立科學、合理、標準化的技術(shù)流程和技術(shù)操作程序，嚴格執(zhí)行是獲得標準化的UCMSC產(chǎn)品和保證質(zhì)量的關鍵。在UCMSC制備過程中，應建立技術(shù)水平的總流程和子流程。干細胞存儲應為每個關鍵技術(shù)環(huán)節(jié)建立相應的技術(shù)操作程序，并在實施過程中進行動態(tài)監(jiān)督和管理。

7.實驗室和100級超凈工作臺必須保持清潔，不得放置無關物品（圖6-12A），使用前必須進行紫外線消毒30分鐘以上。培養(yǎng)液和細胞分離等開放操作只能在100級超凈工作臺酒精燈前無菌區(qū)（圖6-12B）進行，并盡量縮短密封容器外暴露細胞的時間。

8.原代培養(yǎng)的關鍵環(huán)節(jié)是組織塊的制備、貼墻處理和培養(yǎng)體系。組織塊的制備過程應簡單、快速、盡量切割成1mm3以下，使臍UCMSC從組織中延伸生長。組織塊貼墻是臍帶間充質(zhì)干細胞貼墻生長的先決條件。組織塊貼墻的培養(yǎng)過程應避免培養(yǎng)液過多導致組織塊漂浮而不是貼墻。接種組織塊時，只能加入少量培養(yǎng)基或直接將糊狀組織直接種植在培養(yǎng)瓶底，待貼墻牢固后再加入培養(yǎng)液。臍帶間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)物理環(huán)境:滲透壓:280~-330mosm/kgHO，溫度：37℃，pH7.0~7，2。細胞制備操作應堅持簡單、快速、準確的基本原則，嚴格執(zhí)行臍帶間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)操作程序，避免延遲操作，影響細胞活性。

9.必須使用清潔無菌的玻璃吸管和其他設備，通常使用一次性試管、吸管、容器等，嚴禁在實驗室重復使用，嚴格防止交叉污染。培養(yǎng)瓶的特點也是組織塊壁的關鍵因素。干細胞儲存應盡可能使用改性塑料培養(yǎng)瓶，因為這種塑料培養(yǎng)瓶是親水的，UCMSC具有附著在塑料瓶壁上生長的特點，一次性使用成本較低。

10.嚴禁在開放式容器上方操作。裝有試劑或細胞的容器應避免在開蓋狀態(tài)下直立放置。開蓋容器必須傾斜45°使用或放置角落。

11.用于動物實驗的細胞必須高度重視加熱原的污染，并確保所使用的材料合格有效（如無菌材料、無熱原、培養(yǎng)液無菌、有效期內(nèi)等）。與干細胞直接接觸的材料應選擇國家批準的臨床應用產(chǎn)品，并建立抽樣檢驗制度，達到規(guī)定的質(zhì)量標準后由質(zhì)量管理部放行使用。未經(jīng)國家批準的臨床應用產(chǎn)品，應當符合國家有關管理要求。臨床應用水平的UCMSC要求較高。

12.UCMSC培養(yǎng)系統(tǒng)通?；贒MEM/F12培養(yǎng)基添加血清和生長因子。市場上銷售的DMEM/F12培養(yǎng)基有兩種:粉末和液體。建議使用生物公司準備的液體培養(yǎng)基，但不同來源的培養(yǎng)基質(zhì)量可能存在差距，最好固定來源。在培養(yǎng)基中添加血清是一種常見的做法，但要高度重視來源，排除病原體，尤其是病毒性病原體。臨床使用細胞最好不要使用胎牛血清，可以用人體血清或血小板生長因子代替，在培養(yǎng)體系中添加bfgf、FGF、SCF等生長因子能促進臍帶間充質(zhì)干細胞的生長，維持其干細胞特性。干細胞儲存和使用無血清培養(yǎng)基是未來臍帶間充質(zhì)干細胞體外制備的發(fā)展趨勢。其特點是消除了使用血清可能帶來的風險，但存在的問題是成本高，不利于大規(guī)模使用。嚴禁使用可能導致細胞遺傳特性改變成分的條件，嚴禁使用海綿體腦病疫區(qū)的牛血清，盡量避免在干細胞培養(yǎng)過程中使用人或動物源性材料，不使用抗生素，確保干細胞制劑中殘留的培養(yǎng)基成分對患者無不良影響。

13.長期以來，體外代際培養(yǎng)的衰老和突變一直是人們關注的問題，也是影響細胞質(zhì)量的深層次問題。保證臍帶間充質(zhì)干細胞在體外代際培養(yǎng)8次以內(nèi)的安全性和活性。連續(xù)8次代際培養(yǎng)后，個別細胞會發(fā)生染色體變異。

14.在臍帶間充質(zhì)干細胞制備的不同階段，嚴格執(zhí)行操作規(guī)程和質(zhì)量控制標準，確保臍帶間充質(zhì)干細胞制劑無病原微生物污染，無內(nèi)外源毒素污染，確保細胞活力、細胞純度、均勻性、細胞染色體等細胞結(jié)構(gòu)及其生物特性高度穩(wěn)定，達到臨床應用質(zhì)量標準。

15.為保證臨床治療的安全性和有效性，UCMSC制備和鑒定操作人員必須如實認真填寫細胞制備、鑒定和質(zhì)量控制信息并簽字確認，技術(shù)監(jiān)督員應負責技術(shù)操作和細胞質(zhì)量鑒定簽字，干細胞儲存確保只有合格的臍帶間充質(zhì)干細胞才能冷凍儲存。

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