友康生物
2024-07-18
公司熱點前段時間，我們實驗室培養(yǎng)了兩份同樣來源的血液樣本，NK細胞收獲結(jié)果截然相反，一份樣本結(jié)果特別好，另一份樣本細胞完全沒長出來。查來查去最后發(fā)現(xiàn)是二氧化碳培養(yǎng)箱出了問題……
在細胞培養(yǎng)實驗中，影響實驗結(jié)果的因素多種多樣，有一些我們都能想到的因素，比如是否發(fā)生污染、操作是否正確、培養(yǎng)工藝是否足夠好、培養(yǎng)基性能是否優(yōu)秀等，這些都會影響細胞實驗的結(jié)果。
但還有一些我們不容易想到的因素——儀器設(shè)備是否靠譜，比如離心機轉(zhuǎn)速是否穩(wěn)定、培養(yǎng)箱顯示的參數(shù)和實際情況是否有差異、超凈工作臺是否真正能達到無菌……這些因素對細胞實驗的結(jié)果影響不可小覷。
QUESTION:細胞實驗中常用儀器設(shè)備該怎么維護保養(yǎng)？
一、培養(yǎng)箱
培養(yǎng)箱為細胞的體外培養(yǎng)提供了適宜的溫度、濕度和氣體環(huán)境，日常對培養(yǎng)箱的維護保養(yǎng)非常重要，在使用過程中要注意以下幾點：
1 | 定期校準(zhǔn)二氧化碳培養(yǎng)箱是確保其穩(wěn)定性和精確性的關(guān)鍵。建議按照制造商的指南進行校準(zhǔn)，通常是每六個月或一年一次。 |
2 | 校準(zhǔn)過程中需要使用校準(zhǔn)氣體，確保其純度和穩(wěn)定性。校準(zhǔn)氣體的選擇應(yīng)符合國際標(biāo)準(zhǔn)，并在校準(zhǔn)前進行適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)備和檢查。 |
3 | 除了二氧化碳濃度外，還需要校準(zhǔn)溫度和濕度傳感器。這確保了培養(yǎng)箱內(nèi)部環(huán)境參數(shù)的精準(zhǔn)性，對生物樣本的培養(yǎng)至關(guān)重要。 |
4 | 箱內(nèi)培養(yǎng)物不應(yīng)放置太擠，以保證培養(yǎng)物受溫均勻。各層金屬孔架上放置物品不應(yīng)過重，以免將金屬孔架壓彎滑脫，打碎培養(yǎng)物。 |
5 | 培養(yǎng)箱工作時，應(yīng)避免頻繁開門，以保持溫度穩(wěn)定，同時防止灰塵污物進入。停止使用，關(guān)閉總電源鍵及設(shè)備后部的電源開關(guān)。 |
6 | 清潔培養(yǎng)箱時，用浸泡酒精的紗布擦拭箱體內(nèi)壁進行消毒，然后用干紗布將酒精擦除干凈。 |
二、離心機
離心機在細胞的培養(yǎng)過程中起到非常重要的作用，好的離心效果便于控制細胞濃度，還可以保證細胞轉(zhuǎn)移的完全性。對離心機的日常維護保養(yǎng)應(yīng)注意以下幾點：
1 | 定期檢查離心機腔內(nèi)部有無樣品、灰塵聚集或破損采樣管遺留的玻璃殘渣，并按要求清潔。 |
2 | 定期校準(zhǔn)離心機的參數(shù)是保證其準(zhǔn)確運行的關(guān)鍵步驟。根據(jù)廠家提供的說明書或使用手冊，使用合適的校準(zhǔn)工具對離心機進行參數(shù)校準(zhǔn)，例如校準(zhǔn)轉(zhuǎn)速、定時器等。 |
3 | 定期檢查離心機的零部件是否完好無損，如轉(zhuǎn)子是否有損傷或變形，離心杯是否有裂紋等。如果發(fā)現(xiàn)任何問題，應(yīng)及時更換或修復(fù)。 |
4 | 在進行定期維護時，務(wù)必記錄維護的日期、維護項目以及維護的結(jié)果。這樣可以及時了解離心機的維護情況，并在必要時進行修復(fù)或適當(dāng)調(diào)整。 |
分離人PBMC對離心機的要求：
1 | 選擇支持升降速調(diào)節(jié)的離心機品牌，如果離心機不可設(shè)置升降速檔次，PBMC層會比較模糊。（升速：指開始啟動→達到設(shè)定離心力的時間；降速：設(shè)定離心時間完成→機器完全停止。） |
2 | 不同品牌的離心機對應(yīng)的升降速檔位參數(shù)有所不同（具體參數(shù)請咨詢離心機廠家），離心機使用時調(diào)整為慢升慢降，建議升速時間、降速時間均控制在3分鐘左右。升速過快容易導(dǎo)致細胞擠壓、破裂，降速過快容易讓分離好的樣本再次混合。 |
3 | 分離人血液單個核細胞十分考驗離心機的穩(wěn)定性能，建議定期校準(zhǔn)離心機的升降速，一般為一年或每5000次使用。 |
4 | 離心速度太慢或離心時間太短都有可能導(dǎo)致非淋巴細胞難以完全沉淀。分離時的轉(zhuǎn)速與時間根據(jù)不同樣品相應(yīng)調(diào)整。離心速度在2000-2500 r/min，離心時間為15-30 min。 |
三、超凈工作臺
超凈工作臺通過風(fēng)機將空氣吸入預(yù)過濾器，經(jīng)由靜壓箱進入高效過濾器過濾，將過濾后的空氣以垂直或水平氣流的狀態(tài)送出，使操作區(qū)域達到百級潔凈度，保證生產(chǎn)對環(huán)境潔凈度的要求。對超凈工作臺的日常維護保養(yǎng)應(yīng)注意以下幾點：
1 | 根據(jù)環(huán)境的潔凈程度，可定期（一般2～3個月）將粗濾布（滌綸無紡布）拆下清洗或給予更換。 |
2 | 定期（一般為一周）對環(huán)境周圍進行滅菌工作，同時經(jīng)常用紗布沾酒精或丙酮等有機溶劑將紫外線殺菌燈表面擦干凈，保持表面清潔，否則會影響殺菌效果。 |
3 | 當(dāng)加大風(fēng)機電壓已不能使風(fēng)速達到0.32m/s時必須更換高效空氣過濾器。 |
4 | 更換過濾器時，可打開頂蓋，更換時應(yīng)注意過濾器上的箭頭標(biāo)志，箭頭指向即為層流氣流向。 |
5 | 更換高效過濾器后，應(yīng)用Y09-4型塵埃粒子計數(shù)器四周邊框密封是否良好，調(diào)節(jié)風(fēng)機電壓，使操作區(qū)平均風(fēng)速保持在0.32-0.48m/s范圍內(nèi)，再用Y09-4型塵埃粒子計數(shù)器檢查潔凈度。 |
細胞培養(yǎng)是細胞實驗中最基礎(chǔ)也最必要的步驟，其中用到的設(shè)備儀器也起到至關(guān)重要的作用。因此，在日常使用設(shè)備儀器的過程中，要注意對儀器的保養(yǎng)和維護，定期校準(zhǔn)設(shè)備參數(shù)，避免因為這些小細節(jié)而釀成大的失誤！
