近期友康生物多次收到客戶反饋,連續(xù)傳代下間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)下降速率比你們宣傳數(shù)據(jù)明顯要快。經(jīng)過(guò)友康反復(fù)排查,所有證據(jù)指向酶的使用。
胰蛋白酶是細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用最廣泛的消化試劑,主要通過(guò)消化黏附蛋白從培養(yǎng)皿表面釋放貼壁細(xì)胞??蒲蓄I(lǐng)域中通常使用動(dòng)物來(lái)源的胰蛋白酶,但由于雜酶和外源性病毒等安全問(wèn)題并不適用于工業(yè)臨床應(yīng)用。目前市場(chǎng)上臨床細(xì)胞治療應(yīng)用中廣泛采用的是重組胰酶。
重組胰酶通過(guò)基因工程技術(shù)生產(chǎn),不含動(dòng)物源成分,避免了可能帶來(lái)的潛在病毒源污染,產(chǎn)品安全性高,穩(wěn)定性和一致性較好。市面上G品牌、L品牌的胰酶也都取得了不錯(cuò)的市場(chǎng)反響。但由于這些產(chǎn)品適用于有血清和無(wú)血清條件下的多種細(xì)胞系,廣譜性強(qiáng),因此酶活普遍較高,在對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞等對(duì)消化酶敏感的細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)傳代過(guò)程中容易出現(xiàn)細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)下降過(guò)快的問(wèn)題。這無(wú)疑增加了操作難度,對(duì)客戶的技術(shù)水平提出了較高要求。
基于以上原因,友康生物研發(fā)了這款干細(xì)胞溫和消化酶(NC1004),采用無(wú)鈣鎂離子的緩沖鹽溶液體系,將酶活調(diào)整到合適的范圍,消除了因過(guò)度消化對(duì)細(xì)胞后期傳代帶來(lái)的不利影響。操作方便,容錯(cuò)率高,解決了在生產(chǎn)級(jí)的大規(guī)模培養(yǎng)中,消化過(guò)度、難以控制的工藝難題。
友康干細(xì)胞溫和消化酶有哪些優(yōu)勢(shì)?
▲安全性高
微生物表達(dá)的基因重組酶,不含人源動(dòng)物源成分,無(wú)任何外源病毒污染風(fēng)險(xiǎn),極大地降低干細(xì)胞藥物申報(bào)的驗(yàn)證工作量與申報(bào)難度。
▲作用溫和
對(duì)細(xì)胞損傷極小,消化后收獲細(xì)胞數(shù)量較傳統(tǒng)胰酶回收率高10%,細(xì)胞活率高10%,在后續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)更高。即使極限消化15min,細(xì)胞活率仍可在90%以上,大幅度提高干細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的成功率。
▲高效便捷
使用前不需預(yù)溫,從4℃冰箱取出后直接加到細(xì)胞表面即可,即取即用,節(jié)省準(zhǔn)備時(shí)間。消化后無(wú)需終止,使用細(xì)胞培養(yǎng)上清液稀釋即可,降低使用成本。
▲性能穩(wěn)定
由GMP級(jí)管理生產(chǎn)工廠制造,產(chǎn)品均一性穩(wěn)定,內(nèi)毒素含量小于0.25 EU/mL,不溶性微粒水平滿足藥典要求,已獲美國(guó)FAD DMF備案(37790),助力藥物合規(guī)申報(bào)。
“更溫和、更方便、更穩(wěn)定”是我們的優(yōu)勢(shì)。推薦廣大客戶在使用友康干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)體系培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)搭配這款干細(xì)胞溫和消化酶,解決您在細(xì)胞消化過(guò)程中的“疑難雜癥”。如您使用的是其他品牌的消化酶,建議稀釋5倍后再使用。您也可以具體咨詢友康的技術(shù)支持,我們會(huì)針對(duì)性給出建議,為您的細(xì)胞保駕護(hù)航。
▲常見(jiàn)問(wèn)題及解答
1、用無(wú)血清培養(yǎng)基及含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的干細(xì)胞,在使用溫和酶消化方面有什么異同?
答:相同之處在于無(wú)論使用何種培養(yǎng)基,在消化前均需要使用無(wú)鈣鎂離子的緩沖液(BS0301)沖洗細(xì)胞。不同之處在于如果使用無(wú)血清培養(yǎng)基,清洗一次即可;如果使用血清培養(yǎng)基,則必須連續(xù)清洗細(xì)胞三次,以確保無(wú)血清殘留,否則消化時(shí)間會(huì)變長(zhǎng)。
2、干細(xì)胞溫和消化酶的保存溫度條件是2-8℃。如果-20℃保存會(huì)不會(huì)更好?
答:不會(huì)更好,會(huì)更差。溫和酶是特殊設(shè)計(jì)的重組蛋白酶產(chǎn)品,蛋白結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,在2-8℃條件下可穩(wěn)定保存。若放置-20℃環(huán)境,必然涉及反復(fù)凍融問(wèn)題,會(huì)導(dǎo)致該重組蛋白酶活性下降,細(xì)胞消化時(shí)間延長(zhǎng)。
3、溫和消化酶消化細(xì)胞后,需要添加胰酶抑制劑終止消化嗎?
答:不需要。細(xì)胞變圓后添加2倍體積的細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋即可,可極大降低用戶使用成本。
4、在消化時(shí)間方面,溫和消化酶與傳統(tǒng)胰酶有什么差別?
答:溫和消化酶消化時(shí)間要稍長(zhǎng)一些。一般消化干細(xì)胞需要2-5min的時(shí)間。
5、稀釋后,可以不離心去除消化酶,直接傳代嗎?
答:不可以。殘留的消化酶會(huì)影響后續(xù)干細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程,會(huì)導(dǎo)致干細(xì)胞的形態(tài)變化。
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