無菌控制專題（二）|抓住細(xì)胞制品無菌控制關(guān)鍵點

為了有效控制微生物污染，無菌控制策略不僅僅要貫穿于細(xì)胞制品的整個生產(chǎn)流程，實際上這一策略實施應(yīng)遠(yuǎn)早于細(xì)胞制備階段。在細(xì)胞制備開始之前，就要考慮這三個核心點：輸入材料、硬件設(shè)施、人員管理。

細(xì)胞治療過程中的輸入材料包含種子細(xì)胞的采集、細(xì)胞培養(yǎng)基及相關(guān)緩沖液、其它相關(guān)原材料和耗材等。輸入材料可能是細(xì)胞療法過程中引入外來污染的最高風(fēng)險因素；因此，采用明確的策略來降低這些風(fēng)險非常重要。

從供體或細(xì)胞庫獲取細(xì)胞后，對其進(jìn)行分離、轉(zhuǎn)導(dǎo)、選擇和通過細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增，以獲得足夠的細(xì)胞用于治療，從培養(yǎng)基中收獲，配制并包裝成治療劑量供受體使用。為了降低微生物污染的風(fēng)險，必須選擇、控制和測試細(xì)胞療法生產(chǎn)的輸入材料。

硬件設(shè)施是細(xì)胞制品無菌控制的基礎(chǔ)，其設(shè)計、選型、采購及維護(hù)均應(yīng)符合無菌要求。企業(yè)應(yīng)該充分考慮這四個問題：①設(shè)備和設(shè)施的設(shè)計與整個環(huán)境的控制；②生產(chǎn)過程中水、空氣和其它氣體的無菌控制；③消毒和清潔設(shè)施；④環(huán)境和人員檢測設(shè)備。

人員是細(xì)胞制品無菌控制中最不可控的因素，因此加強人員的管理和培訓(xùn)至關(guān)重要。從事細(xì)胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)的人員應(yīng)保持良好的健康狀況，定期進(jìn)行體檢，避免攜帶傳染??；而且需要對操作人員進(jìn)行無菌操作培訓(xùn)和評估，并最終由全面的無菌操作員確認(rèn)。

二、污染控制的關(guān)鍵性指標(biāo)評估

一般來說，細(xì)胞治療產(chǎn)品不經(jīng)過微生物去除或滅菌步驟，因此最終產(chǎn)品檢測應(yīng)評估最終產(chǎn)品或關(guān)鍵中間體是否受到污染，從而確認(rèn)產(chǎn)品的無菌工藝和微生物安全性。這就需要企業(yè)確認(rèn)以下幾個關(guān)鍵性指標(biāo)：

細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌外細(xì)胞膜的組成部分，是最常見、最有效的熱原，可誘發(fā)炎癥反應(yīng)、發(fā)熱反應(yīng)或膿毒性休克等臨床反應(yīng)，因此需嚴(yán)格檢測和控制。一般，可采用凝膠法、濁度法、顯色試驗、重組C因子方法、熱原質(zhì)試驗、單核細(xì)胞活化測試等方法對內(nèi)毒素進(jìn)行檢測。

通過優(yōu)化生產(chǎn)工藝、選擇低內(nèi)毒素的培養(yǎng)基和試劑、加強生產(chǎn)過程的無菌控制等方式，減少內(nèi)毒素的產(chǎn)生和污染。

細(xì)菌、真菌和支原體是細(xì)胞制品中常見的微生物污染類型，其存在會嚴(yán)重影響產(chǎn)品的安全性和有效性。

細(xì)菌真菌污染主要來自于實驗室環(huán)境、實驗人員操作、培養(yǎng)材料以及設(shè)備污染等多個方面。為了降低污染風(fēng)險，需要采取一系列的無菌控制措施，包括加強實驗室環(huán)境管理、規(guī)范實驗人員操作、嚴(yán)格培養(yǎng)材料質(zhì)量控制以及定期清潔和消毒設(shè)備或者使用一次性培養(yǎng)系統(tǒng)等。

支原體污染的主要潛在來源是用于培養(yǎng)的動物血清產(chǎn)品，尤其是開放式培養(yǎng)系統(tǒng)（FDA，2008年）。支原體污染控制機制包括選擇非動物來源培養(yǎng)基、使用封閉式的自動化培養(yǎng)系統(tǒng)。

細(xì)胞治療中，最關(guān)鍵的原材料來自動物或人類（如牛血清或豬胰蛋白酶），可能發(fā)生病毒侵入的風(fēng)險。為了控制風(fēng)險，應(yīng)對細(xì)胞產(chǎn)品的供者做好傳染病篩查，并且企業(yè)應(yīng)從經(jīng)認(rèn)證的供應(yīng)商處購買經(jīng)認(rèn)證的無病毒材料、對外來物料進(jìn)行檢測或在工藝過程中采取病毒滅活步驟。

事實上，還有更好的控制病毒侵入的方法。第四代培養(yǎng)基——化學(xué)成分完全限定的無血清培養(yǎng)基，與過去的血清、血替培養(yǎng)體系不同，因其無人源、無動物源、成分明確等特點，消除了很多致敏、致病以及未知的風(fēng)險隱患，被越來越多的藥企所青睞。